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pEGFP-N1载体是什么 关于pEGFP-N1载体的详细介绍 -为您提供美容整形丰胸留学移民金融等相关信息的专业问答-书法大师晓识库

pEGFP-N1载体为真核细胞表达载体,具有这方面的优点。绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)基因来源于Jellyfish Aequorea Victoria, 是Shimomura等于1962年发觉的蛋白质,由238个氨基酸组成,分子量约为27Kd。GFP在包括热、极端PH和化学变性剂等苛刻条件下都很稳固,用甲醛固定后会连续发出荧光,但在还原环境下荧光会很快熄灭。

优点

pEGFP-N1载体

与以往常用的报告基因相比,GFP具有以下优点:

①在荧光显微镜下,用波长约490 nm的紫外线激发后,即可观察来绿色荧光,直接、简捷、便于检测;

②无需任何的作用底物或共作用物,检测的灵敏度不受反应效率的影响,保证了极高的检出率;

③蛋白本身性质稳固;

④可在多种异源生物中表达且无细胞毒性;

⑤其基因片段长度较小(约717 bp),易于构建融合蛋白,且融合蛋白仍能保持荧光激发活性,为研究其他基因表达产物的分布提供了方便。

pEGFP是一种优化的突变型GFP,使其产生的荧光较普通GFP强35倍,大大增强了其报告基因的敏锐度。pEGFP与其他蛋白的融合表达已有很多成功的例子,而且其N及C端均可融合,并不影响其发光。

pEGFP-N1载体上携带有EGFP蛋白表达基因,如上图质粒图谱所示。

特点

①从结构上看,该质粒具有很强的复制能力,可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞,这是保证目的基因稳固表达的因素之一;

②含有高效的功能强大的启动子SV40和PCMV,可以使目的基因在增殖的细胞中稳固表达;

③具有多克隆位点,便于目的基因的插入;

④该载体具有neo基因,可以摘用G418来挑选已成功转染了该载体的靶细胞。

这些特别的结构可以实现目的基因在靶细胞内的稳固表达。

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